常用的固定剂种类很多，固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。固定剂可分为两大类：有机溶剂和交联剂。有机溶剂如乙醇和丙酮能够去除脂类物质使细胞脱水，把蛋白质沉淀在细胞结构上。交联剂一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来，形成一个相互连接的抗原网。两种方法均使蛋白质抗原部分变性。因此，在细胞染色中，能够识别变性蛋白的抗体更加有用。在某些情况下，只有用此类抗体才能得到满意的结果。

 

    往往凭经验选择固定剂。虽然许多人发现用交联剂固定细胞可以获得较好的结果，但没有通用规则可以参考。可以试用两种方法，然后选择较好的一种。

 

    悬浮细胞染色通常用于检测细胞表面抗原。因为细胞呈悬浮状态，洗涤过程复杂，因此，应注意离心时间不要过长或转速太高。

 

    1．所需溶液

    4％多聚甲醛(临用前配制)、PBS。

 

    2．操作步骤

    (1)PBS配制4％多聚甲醛；

    (2)用PBS洗涤细胞2次，用200g离心5min；重悬细胞。

    (3)小心用4％多聚甲醛溶液悬浮细胞，细胞浓度约为1X106／m1 15min，间或摇动；

    (4)200g离心5rain，用PBS重悬细胞，重复洗涤细胞2次；室温下静置

    (5)用含0．2％TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化细胞2min(室温)，有的抗原需15min，具体时间视抗原而定；

    (6)200g离心5rain，用PBS重悬细胞，重复洗涤细胞2次。 

    此时的细胞标本可用于后续的抗体检测。