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再扩增scFv基因文库以添加限制性位点进行克隆

更新时间:2012-12-29点击次数:1152

[方法]
1.在0.5ml微量离心管中,配制两个50/z1PCR反应混合液(1个用于VH—VκscFv文库, 另1个用于Vu—Vλ scFv文库),其中含有:
● 水,36.5//1
● 10XTag缓冲液,5.0ul
● 20XdNTP, 2.5ul
● 正向引物,2.0ul
● 反向引物,2.0ul
● scFv基因文库(约long), 1.0ul
2.在热循环仪格内加热反应管到94℃,5分钟。如果没有加热盖,则滴加1滴轻质矿物油覆盖反应液。
3.加入1.0ul(5单位)TdQDNA聚合酶。
4.以94℃ 1分钟、55℃ 1分钟、72℃ 1分钟的条件共循环25次,扩增scFv基因。
5.用Wizard PCR纯化试剂盒,纯化PCR产物。

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