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连接scFv和载体DNA并转化大肠杆菌

更新时间:2013-03-02点击次数:1380

[器材和试剂]
● 去离子水(millipore)
● T4DNA连接酶和10×连接酶缓冲液(NEB)
● 16℃水浴
● 消化的scFv文库DNA
● pHENl DNA,用NcoI和NotI消化(100ng/ul)
● 电感受态大肠杆菌TGl细胞(Strat aeene)
● 用于将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备

[方法]
1.配制1个50ul连接混合液,包含:
● 10×连接缓冲液,5uI
● 水,16ul
● NcoI和NotI消化的pHENl(100g/ul), 20ul
● VcoI和NotI消化的scFv文库(100g/ul), 7ul
● T4 DNA连接酶(400U/ul),2ul
2.16℃孵育反应液过夜。
3.乙醇沉淀DNA并用70%乙醇洗涤沉淀1次。
4.重悬DNA于10ul水中。
5.用4份相同的2.5ul的DNA分别电转化到电感受态大肠杆菌TGl细胞中。
6.确定文库容量,并将菌文库材抖储存于-70℃。

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